本世纪30 年代.序幕是在南美的一处热带丛林之中.美国考古学家印第安纳·琼斯正在试图接近一处古代的洞窟,那里供奉着异教神的纯金像.尽管琼斯成功地进入洞中,战胜了暗道机关、毒箭巨石、因贪婪而背叛的向导,取到了神像.但一出洞口却被他的老对手纳粹德国的考古学家劫走.琼斯也险遭土著毒手,幸得他的朋友驾机前来营救。
印第安纳·琼斯回到了安静的大学课堂.但很快,美国政俯的官员前来拜访他,他被告知纳粹的考古学家云集埃及,美方情报认为,他们在那里发现了《圣经》记载的摩西的約柜,内装"摩西之星的碎片",可能成为杀伤力极大的秘密武器.琼斯欣然奉命前往.他首先来到了尼泊尔寻找一个叫玛丽的姑娘,他知道姑娘拥有一块父亲留下的铜牌,那是发掘約柜的线索.姑娘独自经营着一家酒馆,她美丽、大胆而善饮,并深深地爱着琼斯.由于对他久久不至的怨气,她拒绝將她作为护身符的铜牌交給琼斯.但纳粹分子接踵而至,以酷刑威胁姑娘交出铜牌; 琼斯赶到,在姑娘的帮助下与纳粹歹徒展开搏斗.其中一个德国考古学家发现了掉在火中的铜牌,他伸手去抓,很快惨叫着抱着一只烫伤的手逃去.玛丽的酒馆在大火中变为灰烬,姑娘取出铜牌与琼斯一起赶赴埃及。
一到埃及,琼斯立刻得到了埃及朋友的帮助,但曾夺走金像的纳粹考古学家也来到埃及.在街上,玛丽发现了一只穿红马甲的小猴子,十分宠爱,小猴子也乐意与她亲热.但这只猴子的主人却正是一个独眼的埃及奸细.他们很快在集市上受到一伙黑衣人的袭击,琼斯独自御敌,玛丽躲进一只大洗衣篮,可猴子向敌人尖叫,玛丽被纳粹分子绑架。
琼斯失去了玛丽,十分悲痛,但他严词拒绝了纳粹的威胁利诱,并在埃及孩子的保护下安然离开.琼斯下榻的正是独眼人的客栈,奸细在琼斯的枣盘里下毒,却被猴子吃掉,猴子立刻死了.这使琼斯及时地发现了阴谋.纳粹分子驱赶埃及人进行大规模、无目的的发掘,而琼斯凭借姑娘的铜牌,很快发现了約柜的准确位置.在埃及朋友的帮助下,他们在纳粹的眼皮底下开始了秘密发掘.与此同时,玛丽设计灌醉纳粹,正要脱身,却被新到的敌人截住.此人正是前往尼泊尔的纳粹头子,他虽然烫伤了手,可铜牌也在他手上留下了清晰的印迹.靠了这"伤疤",他们发现了琼斯的行踪.琼斯等人终于发现了金碧辉煌的約柜,他们刚刚从一个布满毒蛇的地洞中將約柜启出地面,纳粹已然到来,他们唾手得到約柜,却將玛丽抛入蛇洞,琼斯和玛丽一起被封在蛇洞之中.琼斯带领姑娘另觅出路,从蛇堆、骷髅、暗道机关中找到出口,逃出险境。
德国军人正准备用飞机运走約柜,琼斯和玛丽在众寡悬殊的情况下与敌人周旋,展开了一场恶斗,玛丽登上了一架飞机,用机上的重机枪阻击敌人,而琼斯则和一个他无法与之匹敌的德军"巨人"周旋,他巧妙地把大家伙诱到飞机下,旋转的螺旋桨把后者的头颅打得粉碎.玛丽无意中开动了直升飞机,开始滑行的飞机撞破了输油车,德国的军用机场陷入了一片火海.纳粹被迫从陆路运送約柜.琼斯纵马赶去,在崎岖的山间公路上与敌人展开了惊心动魄的搏斗,截住了纳粹车队.敌人又一次步行运送,终于为琼斯劫获。
琼斯不辱使命,得到了約柜,他决定乘海轮由水路將約柜运往美国.他的埃及朋友依依不舍地为他和玛丽送行.姑娘为遍体鳞伤的琼斯包扎,他们终于停止了调侃,彼此表达了心中的深情.可在公海上,德军潜艇突然出现,他们强行登船搜查,掠走宝物,并抓到了玛丽.可琼斯趁敌不备,机智地潜入潜艇之中,随之进入了德军在一岛屿上的地下工事.尽管他化妆成一个德国卫兵,但仍被纳粹分子认出,遂被逮捕.狂喜的纳粹分子举行盛大仪式,打开了約柜.被绑在一旁的琼斯连忙警告姑娘,不论发生什么也不要张开眼睛去看.从打开的約柜中升起一团光雾,接着幻化为一个美女,美女变为一个丑陋的老妪,继而光团散开来,包围了每个德国军人,他们迅速地在这强光中融化了.一阵飓风之后,約柜的盖子升上云端,又稳稳地落下.地下工事中已空无一人一物,只有琼斯和玛丽幸免于难。
琼斯终于將約柜运回美国.但美国政俯的官僚们却將它封存起来,琼斯十分愤怒,却也无济于事.他只好挽着玛丽的手无奈地离去。
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